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人P物質(SP)ELISA試劑盒-實驗類型(夾心法)

更新時間:2018-10-18      瀏覽次數:2197

人P物質(SP)ELISA試劑盒-實驗類型(夾心法)實驗原理:

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本人P物質(SP)水平。用純化的人P物質(SP)捕獲抗體包被微孔板,制成固相體,往包被的微孔中依次加入人P物質(SP),再與HRP標記的檢測抗體結合,形成抗體-抗原-酶標抗體復合物,經過*洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色,并在酸的作用下轉化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人P物質(SP)呈正相關。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標準曲線計算樣品人P物質(SP)含量

 

 

操作步驟

  • 標準品的加樣:設置標準品孔和樣本孔,標準品孔各加不同濃度的標準品50μL;
  • 加樣:分別設空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動混勻
  • 加酶:每孔加入酶標試劑100μl,空白孔除外
  • 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘
  • 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復5次,拍干。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(此時藍色立轉黃色)
  • 測定:以空白孔調零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應在加終止液后15分鐘以內進行。
  • 試劑盒性能:

    1.樣品線性回歸與預期濃度相關系數R值為0.95以上。

    2.批內變異系數與批間變異系數應分別小于10%和15% 。

     

    檢測范圍:                                              

    3.75 pg/mL - 120 pg/mL

     

    靈敏度:                                              

    低檢測濃度小于0.1 pg/mL

     

    保存條件及有效期:

    1.試劑盒保存: 2-8

    2.有效期: 6個月

 

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