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人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)ELISA試劑盒含量檢測

更新時(shí)間:2018-06-06      瀏覽次數(shù):2168

人胰高血糖素樣肽1GLP-1酶聯(lián)免疫分析(ELISA)

試劑盒使用說明書

Cat.No. RJ-14611

本試劑僅供研究使用       目的:本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織勻漿細(xì)胞培養(yǎng)物上清及相關(guān)液體樣本中胰高血糖素樣肽1(GLP-1)的含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測定標(biāo)本人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)水平。用純化的人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)捕獲抗體包被微孔板,制成固相體,往包被的微孔中依次加入人胰高血糖素樣肽1(GLP-1),再與HRP標(biāo)記的檢測抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過*洗滌后底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長下測定吸光度(OD值),通過標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品人胰高血糖素樣肽1(GLP-1)含量

試劑盒組成

試劑盒組成

48孔配置

96孔配置

保存

說明書

1份

1份

 

封板膜

2片

2片

 

密封袋

1個(gè)

1個(gè)

 

酶標(biāo)包被板

1×48

1×96

2-8℃保存

標(biāo)準(zhǔn)品

0.3ml×6管

0.3ml×6管

2-8℃保存

酶標(biāo)試劑

5 ml×1瓶

10 ml×1瓶

2-8℃保存

樣品稀釋液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

顯色劑A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

顯色劑B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

終止液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

2-8℃保存

20×濃縮洗滌液

15ml×1瓶

25ml×1瓶

2-8℃保存

注:標(biāo)準(zhǔn)品濃度依次為:12、6、3、1.5、0.75、0 pmol/L.

 

樣本處理及要求

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

3. 尿液:用無菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測分泌性的成份時(shí),用無菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬/ml左右。通過反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆谩?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測,其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過氧化物酶的(HRP)活性。

 

操作步驟

  • 標(biāo)準(zhǔn)品的加樣:設(shè)置標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣本孔,標(biāo)準(zhǔn)品孔各加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50μL;
  • 加樣:分別設(shè)空白孔(空白對照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同)、待測樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl,然后再加待測樣品10μl(樣品zui終稀釋度為5倍)。加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻
  • 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑100μl,空白孔除外
  • 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育60分鐘
  • 配液:將20倍濃縮洗滌液用蒸餾水20倍稀釋后備用。
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)
  • 測定:以空白孔調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值) 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進(jìn)行。
  • 計(jì)算

    以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),    

    在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD      

    值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋      

    倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)      

    準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值      

    代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋      

    倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。                  

     

                                                  

     

    (此圖僅供參考)

     

     

     

    試劑盒性能:

    1.樣品線性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值為0.95以上。

    2.批內(nèi)變異系數(shù)與批間變異系數(shù)應(yīng)分別小于10%和15% 。

     

    檢測范圍:                                              

    0.375 pmol/L - 12 pmol/L

     

    靈敏度:                                              

    zui低檢測濃度小于0.1 pmol/L

     

    保存條件及有效期:

    1.試劑盒保存: 2-8

    2.有效期: 6個(gè)月

     


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